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DNA電泳套裝的基本技術

更新時間:2017-11-06點擊次數(shù):1362
  DNA電泳套裝電壓和溫度,電泳時電場強度不應該超過20V/cm,電泳溫度應該低于30℃,對于巨大的DNA電泳,溫度應該低于15℃。注意如果電泳時電壓和溫度過高,可能導致出現(xiàn)條帶模糊和不規(guī)則的DNA帶遷移的現(xiàn)象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象.DNA樣品的純度和狀態(tài),注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現(xiàn)象。乙醇沉淀可以去除多余的鹽,用酚可以去除蛋白。注意變性的DNA樣品可能導致條帶模糊和缺失,也可能出現(xiàn)不規(guī)則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對DNA樣品加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。
 
  DNA電泳套裝方法,一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶.凝膠濃度,對于瓊脂糖凝膠電泳,濃度通常在0.5~2%之間,低濃度的用來進行大片段核酸的電泳,高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎,小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。注意高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨,造成條帶缺失現(xiàn)象。
 
  DNA電泳套裝是基因工程中zui基本的技術,DNA制備及濃度測定、目的DNA片段的分離,重組子的酶切鑒定等都需要電泳完成。根據(jù)分離DNA大小及類型的不同,DNA電泳可分為以下兩種,聚丙烯酰胺凝膠電泳   適合分離1kb以下的片段,zui高分辨率可達1bp,也用于分離寡核苷酸,在引物的純化中也常用此種方法進行純化,也稱PAGE純.瓊脂糖凝膠電泳,可分離的DNA片段大小因凝膠濃度不同而異,膠濃度為0.5~0.6%的凝膠可以分離的DNA片段范圍為20bp~50kb.電泳結果用溴化乙錠(EB)染色后可直接在紫外下觀察.并且可觀察的DNA條帶濃度為納克級,而且整個過程一般1小時即可完成,由于該方法操作簡單快捷,在基因工程中較為常用.

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